PERHITUNGAN KOLONI

Laporan Praktikum ke-5                                 Hari/Tanggal:  2 Desember 2014

Mata Kuliah: Mikrobiologi Terapan               Tempat Praktikum: Lab.TIP                                            

Paralel : 04                                                      Asisten: Taufik Hidayat (1210612034)

PERHITUNGAN KOLONI

Lestari Refis Tanjung

1310611080

FAKULTAS PETERNAKAN

JURUSAN ILMU PETERNAKAN

UNIVERSITAS ANDALAS

PADANG

 2014

PENDAHULUAN

Latar Belakang

Bakteri merupakan mikro uniseluler. Pada umumnya bakteri tidak mempunyai klorofil. Ada beberapa yang fotosintetik dan reproduks iaseksualnya secara pembelahan. Bakteri tersebar luas di alam, di dalam tanah,di atmosfer, di dalam endapan-endapan lumpur, di dalam lumpur laut, dalamair, pada sumber air panas, di daerah antartika, dalam tubuh manusia, hewan,dan tanaman. Jumlah bakteri tergantung pada keadaan sekitar. Misalnya, jumlah bakteri di dalam tanah tergantung jenis dan tingkat kesuburan tanah. Pengamatan bakteri dapat dilakukan secara individual, satu per satu,maupun secara kelompok dalam bentuk koloni. Bila bakteri yang ditumbuhkan di dalam medium yang tidak cair, maka akan terjadi suatu kelompok yang dinamakan koloni. Bentuk koloni berbeda-beda untuk setiap spesies, dan bentuk tersebut merupakan ciri khas bagi suatu spesies tertentu.

Bakteri adalah makhluk hidup yang sangat kecil dan hanya dapat dilihat dengan mikroskop. Untuk menyelidiki ukuran bakteri, dalam pemeriksaan mikrobiologi biasanya digunakan satuan mikron (diberi simbolhuruf µ m), sEperti misalnya pada pengukuran virus. Selayaknya mahluk hidup, bakteri juga memiliki karakteristik. Baik dari bentuk, ukuran, warna elevansi dan margin. Terdapat beberapa cara yang dapat dilakukan untuk menentukan jumlah bakteri yang terdapat pada bahan pemeriksaan. Mulai dari yang paling sederhana dengan tingkat keakuratan yang rendah,sampai dengan yang menggunakan teknologi maju dengan tingkat keakuratan yang sangat tinggi. Pada praktikum mikrobiologi ini, pembiakan bakteri dilakukan untuk mempelajari yang diteliti sehingga dapat dihitung menggunakan metode sederhana. Selain itu, penentukan jumlah bakteri yang ada pada bahan pemeriksaan dilakukan untuk mengetahui seberapa banyak bakteri yang ada pada daerah pengambilan sampel.

Tujuan

Untuk mengetahui dan memahami cara menghitung koloni dari bakteri

TINJAUAN PUSTAKA

Beberapa cara dapat dilakukan untuk menentukan jumlah bakteri yangterdapat pada bahan pemeriksaan, yaitu :.Cara Penghitungan pada Lempeng Pembiakan (Plate Count)Dalam hal ini pun bahan pemeriksaan jika perlu harus diencerknuntuk menghindarkan jumlah koloni terlalu banyak sehingga tidak dapatdihitung. Hasil hitungan yang dapat diandalkan adalah antara 30-300 koloni pada tiap lempeng pembiakan.2. Cara Menghitung Langsung (Metode Kaca Objek)Dengan cara ini yang terhitung adalah baik bakteri hidup maupunmati, sehingga dengaan cara ini tidak diketahui berapa jumlah bakteri hidup,tetapi pengerjaannya lebih cepat.a. Metode Bilik Hitung b. Metode Breed3. Metode Ukur KekeruhanMetode ini menggunakan tabung-tabung dengan suspensi dari berbagai derajat kekeruhan (menurut Brown).4. Metode Turbidimetri dan NefelometriPada metode ini penghitungan didasarkan pada kenyataan bahwasuatu populasi atau kelompok sel-sel dalam medium cair menyerap ataumenyebarkan cahaya yang sebanding dengan derajat kekeruhan medium itu.5. Jumlah Perkiraan TerdekatJumlah perkiraan terdekat pada penghitungan bakteri didasarkan atasasumsi bahwa bakteri tersebar normal dalam medium cair, yang berarti biladiambil berulang-ulang sampel dengan takaran yang sama dari suatu sumber dapat diharapkan mengandung jumlah rata-rata yang sama, biarpun antarasampel yang satu sedikit lebih atau kurang daripada yang lain

Standar Plate Count (SPC) merupakan suatu standar yang digunakan untuk melaporkan hasil analisis mikrobiologi. SPC menjelaskan cara menghitung koloni yang tumbuh pada cawan serta cara memilih data yang ada untuk menentukan jumlah koloni.      

      A.     Metode TPC (Hitungan Cawan)

Metode hitungan cawan didasrkan pasa anggapan bahwa setiap sel yang dapat hidup akan berkembang biak menjadisatu koloni. Jadi jumlah koloni yang muncul pada cawan mengandung indeks bagi jumlah mikroorganisme yang dapat terkandung dalam sampel. Teknik yang harus dikuasai dalam metode ini adalah mengencerkan sampel dan mencawankan hasil pengenceran tersebut. Setelah inkubasi, jumlah masing-masing cawan diamati. Untuk memenuhi persyaratan statistic, cawan yang dipilih untuk pengitungan koloni adalah yang mengandung antara 30-300 koloni. Karena jumlah mikroorganisme dalam sampel tidak diketahui sebelumnya, maka untuk memperoleh sekurang-kurangnya satu cawan yang mengandung koloni dalam jumlah yang memenuhi persyaratan tersebut, harus dilakukan sederetan pengenceran dan pencawanan. Jumlah organisme yang terdapat dalam sampel asal ditentukan dengan menggunakn jumlah koloni yang terbentuk dengan faktor pengenceran pada cawan yang bersangkutan.

Rumus yang digunakan dalam perhitungan :

Faktor pengenceran     = Pengenceran x Jumlah yang di tanam

Jumlah koloni              = Jumlah yang di tanam x Faktor pengenceran

     B.    Metode MPN

 Metode MPN terdiri dari tiga tahap, yaitu uji pendugaan (presumtive test), uji konfirmasi (confirmed test), dan uji kelengkapan (completed test). Dalam uji tahap pertama, keberadaan coliform masih dalam tingkat probabilitas rendah; masih dalam dugaan. Uji ini mendeteksi sifat fermentatif coliform dalam sampel. Karena beberapa jenis bakteri selain coliform juga memiliki sifat fermentatif, diperlukan uji konfirmasi untuk mengetes kembali kebenaran adanya coliform dengan bantuan medium selektif diferensial. Uji kelengkapan kembali meyakinkan hasil tes uji konfirmasi dengan mendeteksi sifat fermentatif dan pengamatan mikroskop terhadap ciri-ciri coliform: berbentuk batang, Gram negatif, tidak-berspora (Fardiaz,1989).

Pada metode perhitungan MPN ini digunakan bentuk tiga seri pengenceran, yang pertama 10^-1, 10^-2, dan 10^-3. Kemudian dari hasil perubahan tersebut dicari nilai MPNnya pada tabel nilai MPN, dan untuk jumlah bakterinya maka digunakan rumus (Gobel, 2008).

Metode hitungan cawan dapat dibedakan atas dua cara yaitu
Metode tuang (pour plate) Metode permukaan (surface / spread plate) Pada perhitungan menggunakan metode cawan, diperlukan suatu pengenceran agar jumlah koloni mikrobia yang ada pada cawan dapat dihitung dan sesuai standar, yaitu berjumlah 30 – 300 per cawan. Pengenceran dilakukan secara decimal untuk memudahkan perhitungan. Cara menghitung koloni pada cawan adalah
Cawan yang dipilih dan dihitung adalah yang mengandung jumlah koloni antara 30 sampai 300. Beberapa koloni yang bergabung menjadi satu merupakan suatu kumpulan koloni yang besar dimana jumlah koloninya diragukan, dapat dihitung sebagai satu koloni.suatu deretan (rantai) kolini yang terlihat sebagai suatu garis tebal dihitung sebagai satu koloni. Sedangkan data SPC harus mengikuti peraturan sebagai berikut Hasil yang dilaporkan hanya terdiri dari dua angka, yaitu angka pertama dibelakang koma dan angkan kedua dibelakang koma. Jika angka ketiga sama dengan atau lebih besar dari 5, harus dibulatkan satu angka lebih tinggi pada angka kedua. Jika semua pengenceran yang dibuat untuk menanam menghasilkan angka kurang dari 30 pada cawan petri, hanya jumlah koloni pada pengenceran yang terendah yang dihitung. Hasilnya dilaporkan sebagai kurang dari 30 dikalikan dengan besarnya pengenceran, tapi jumlah yang sebenarnya harus dicantumkan. Jika semua pengenceran yang dibuat untuk menanam menghasilkan angka lebih besar dari 300 pada cawan petri, hanya jumlah koloni pada pengenceran yang tertinggi yang dihitung. Hasilnya dilaporkan sebagai lebih dari 300 dikalikan dengan besarnya pengenceran, tapi jumlah yang sebenarnya harus dicantumkan. Jika cawan dari dua tingkat pengenceran menghasilkan koloni dengan jumlah antara 30 dan 300, dan perbandingan antara hasil tertinggi dan terendah dari kedua pengenceran tersebut lebih kecil atau sama dengan 2, yang digunakan adalaha rata-ratanya. Jika perbandingan antara hasil tertinggi dan terendah dari kedua pengenceran tersebut lebih besar dari 2, yang dilaporkan hanya hasil terkecil.
Jika digunakan dua cawan Petri (duplo) per pengenceran, data yang diambil harus dari kedua cawan tersebut, meskipun salah satunya tidak memenuhi syarat diantara 30 dan 300. Pengenceran dihasilkan lebih dari 300 koloni  pada cawan petri berarti pengenceran rendah, oleh karena itu jumlah koloni pada pengenceran tertinggi yang diambil. (Dwijoseputro, 2005).

 Koloni adalah kumpulan dari mikrobia yang memilki kesamaan sifat-sifat seperti bentuk, susunan, permukaan, dan sebagainya. Sifat-sifat yang perlu diperhatikan pada koloni yang tumbuh di permukaan medium adalah (Dwidjoseputro, 1978), Besar kecilnya koloni. Ada koloni yang hanya serupa suatu titik, namun ada pula yang melebar sampai menutup permukaan medium.
Bentuk. Ada koloni yang bulat, ada yang memanjang. Ada yang tepinya rata, ada yang tidak rata. Kenaikan permukaan. Ada koloni yang rata saja dengan permukaan medium, ada pula yang timbul yaitu menjulang tebal di atas permukaan medium.
Halus kasarnya permukaan. Ada koloni yang permukaannya halus, ada yang permukaannya kasar dan tidak rata. Wajah permukaan. Ada koloni yang permukaannya mengkilat, ada yang permukaannya suram. Warna. Kebanyakan koloni bakteri berwarna keputihan atau kekuningan. Kepekatan. Ada koloni yang lunak seperti lendir, ada yang keras dan kering (Dwidjoseputro, 1978).

Kisaran hitung seperti yang sampai saat ini diketahui bahwa kisaran yang paling tepat dalam menghitung koloni pada cawan adalah 30-300 koloni/cawan atau 25-250 koloni/cawan. Permulaan penentuan kisaran ini berawal dari seorang mikrobiologiwan bernama Nersser (1895) yang menyimpulkan bahwa hitungan cawan yang paling baik adalah cawan yang memiliki 10.000 koloni/cawan yang perhitungannya dilakukan dengan mikroskop pada perbesaran rendah.

Medium Acidified Potato Dextrose Agar (APDA) Pembuatan medium yang dilakukan oleh manusia dapat berupa medium cair dan medium padat. Dahulu orang menggunakan kentang yang dipotong-potong untuk medium (Dwidjoseputro, 2005). Suatu penemuan yang lebih baik sekali ialah medium dari kaldu yang dicampur dengan sedikit agar-agar. Setelah medium disterilisasikan, kemudian dibiarkan mendingin, diperoleh medium padat yang dapat ditanami mikroorganisme (Dwiloka, 2000). Medium harus mengandung semua nutrisi yang mudah digunakan oleh mikroorganisme. APDA dibuat untuk menumbuhkan jamur. Hal itu karena jamur membutuhkan medium yang mengandung karbohidrat, dan pada medium APDA ini terdapat kentang (sumber karbohidrat) sebagai media yang cocok untuk menumbuhkan jamur. APDA (Acidified Potato Dextrose Agar) yaitu digunakan untuk kultivasi dan identifikasi jamur sehingga mempermudah dalam morfologinya (Irianto, 2006).

Aquades Air merupakan zat yang tidak berwarna, tidak berasa dan tidak berbau pada keadaan standart. Memiliki nama IUPAC Dihydrogen monoxide, Oxidane dan memiliki rumus molekul H2O. Sifat fisik dan sifat kimia air diantaranya adalah massa molar 18.01528(33) g mol-1, densitas 1000 kg m-3, liquid (4 °C),917 kg m-3, titik leleh 0 °C, 32 °F ( 273.15 K ), titik didih 100 °C, 212 °F ( 373.15 K), bentuk molekul hexagonal, viskositas 0.001Pa  saat 20 °C, momen dipol 1.85 D, dan kelarutan dalam air larut dalam berbagai perbandingan (Anonim.2013)

Colony counter adalah suatu alat yang dapat digunakan untuk melakukan perhitungan sel secara cepat dan dapat digunakan untuk konsentrasi sel yang rendah. Pada mulanya diperuntukkan untuk menghitung sel darah. Memiliki garis-garis mikroskopis pada permukaan kaca. Luas total dari chamber adalah 9 mm². Chamber tersebut nantinya akan ditutup dengan coverslip dengan ketinggian 0.1 mm di atas chamber floor. Penghitungan konsentrasi sel ini bergantung pada volume di bawah coverslip. Pada chamber terdapat 9 kotak besar berukuran 1 mm2 dan kotak-kotak kecil, di mana satu kotak besar sama dengan 25 kotak kecil sehingga satu kotak besar tersebut memiliki volume sebesar 0.0001 ml (Strober, 2001).

MATERI DAN METODE

Materi

Dalam praktikum perhitungan koloni bahan yang digunakan yaitu aquades, air kotor dan PDA. Sedangkan alat yang digunakan yaitu testup, cawan pertridis, pipet tetes dan lup untuk menghitung koloni.

Metode

Sediakan semua bahan yang akan digunakan yaitu 6 buah testup, air kotor, aquades dan pipet tetes. Lakukan terlebih dahulu dengan memasukkan aquades ke dalam testup sebanyak 9 ml aquades pada masing-masing testup. kemudian teteskan sebanyak 1 ml air kotor kedalam testup yang pertama saja, dan kemudian dihomogenkan. Setelah homogen selanjutnya ambil sebanyak 1 ml air kotor yang telah dihomogenkan pada testup pertama tadi ke dalam testup yang kedua, kemudian di homogenkan kembali dan diambil kembali sebanyak 1 ml dari testup yang ke 2 ke testup yang ke 3. Begitu seterusnya sampai pada testup yang keenam. Pada testup yang kelima dan keenam diambil sebagai sampel praktikum perhitungan koloni, ambil sebanyak 1 ml air pada testup kelima dan keenam masukkan ke dalam cawan Petridis kemudian beri label dan tunggu selama 1 hari.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Hasil

Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan didapatkan hasil sebagai berikut:

Cawan petridis	waktu	Jumlah koloni
10-5	1 hari	31
10-6	1 hari	34

   

Pembahasan

Setelah melaksanakan praktikum pengenceran, pada praktikum kali ini dilakukan prosedur pengamatan karakteristik koloni yang tumbuh pada cawan petri yang telah diinkubasi sebelumny selama 1 hari. Ukuran seperti titik kecil berwarna putih jumlahnya pada masing-masing cawan 10^-5 dan 10^-6 sebagai sampel perhitungan koloni yang diambil dalam praktikum ini berjumlah 31 dan 34. Kisaran hitung seperti yang sampai saat ini diketahui bahwa kisaran yang paling tepat dalam menghitung koloni pada cawan adalah 30-300 koloni/ cawan atau 25-250 koloni/cawan. Permulaan penentuan kisaran ini berawal dari seorang mikrobiologiwan bernama Nersser (1895) yang menyimpulkan bahwa hitungan cawan yang paling baik adalah cawan yang memiliki 10.000 koloni/cawan yang perhitungannya dilakukan dengan mikroskop pada perbesaran rendah bentuknya bulat halus dan bewarna putih. Warna. Kebanyakan koloni bakteri berwarna keputihan atau kekuningan. Kepekatan. Ada koloni yang lunak seperti lendir, ada yang keras dan kering (Dwidjoseputro, 1978). Pengamatan dilakukan dengan menggunakan kaca pembesar atau lup. Dengan menggunakan lup, maka koloni akan nampak lebih jelas. Pengamatan ini tetap dilakukan di dekan api bunsen agar terhindar dari kontaminasi bakteri lain yangada di udara. Setalah dilakukan penggamatan dan penggambaran karakteristik dari bakteri tersebut,dilakukan penghitungan jumlah koloni dari bakteri yang tumbuh pada masing - masing cawan.Akan tetapi, perhitungan dengan metode hitungan cawan ini belum dapat memberi data yang akurat. Mengingat bahwa metode hitungan cawan ini memiliki kelemahan-kelemahan hasil perhitungan tidak menunjukkan jumlah sel yang sebenarnya, karena beberapa sel yang berdekatan, mungkin membentuk satu kolon.                                                                                                                        

KESIMPULAN

Berdasarkan hasil pengamatan yang telah dilakukan maka dapat disimpulkan bahwa perhitungan koloni pada cawan Petridis pada testup kelima 10-5 dan pada cawan Petridis dari testup keenam 10-6 adalah 31 dan 34 koloni. Koloni pada cawan Petridis berwarna putih dan berbentuk halus kecil-kecil. Perhitungan dengan menggunakan PDA yang dicampur dengan aquades dan kotoran dihomogenkan.                                                                                                                                   

DAFTAR PUSTAKA

Anonim.2013.”Perhitungan Jumlah Bakteri”.httpwww.scribd.comdoc135885742

              perhitungan-jumlah-bakteri=htm.(4 Juni 2013).

Bown.1989,Dasar-Dasar Mikrobiologi JilidII.Jakarta:Universitas Indonesia press.

Dwidjoseputro, D,2005.” Dasar dasar mikrobiologi”. Jakarta: Djambatan.

Dwidjoseputro, D,1978.” Dasar dasar mikrobiologi”. Jakarta: Djambatan

Fardiaz .1989.Mikrobiologi Dalam Praktek. Makassar : UMM Press.

Gobel.2008. “Mikroba”.Jakarta : PT. Gramedia

Irianto .2006.”Perhitungan Mikroba”.Surabaya:Gramedia.

Jimmo.2013.”Perhitungan Pertumbuhan Mikroba”.Malang:Universitas Brawijaya.

Strober, Lud.2007.Mikrobiologi Umum.

LAMPIRAN

Pada cawan Petridis 10^-5 mendapatkan koloni sebanyak 34 koloni

·         Sel relatifnya/CFU^,s per ml adalah :

Menggunakan metode pour: koloni = 34, Fp= 1/10^-5SP= 1 ml

CFU^,s per ml adalah   = jumlah koloni x faktor pengenceran

 = 34 x 10-⁵ CFU^,s/ 1 ml

                                     = 3.400.000 CFU^,s/ 1  ml

= 34 x 10^-5 CFU^,s/ ml                                                     = 3,4 x 10^-6 CFU^,s/ ml

Pada cawan Petridis 10^-6 mendapatkan koloni sebanyak 34 koloni

·         Sel relatifnya/CFU^,s per ml adalah :

Menggunakan metode pour: koloni = 31, Fp= 1/10^-6SP= 1 ml

CFU^,s per ml adalah   = jumlah koloni x faktor pengenceran

 = 31 x 10^-6 CFU^,s/ 1 ml

                                     = 3.100.000 CFU^,s/ 1  ml

= 31 x 10^-6 CFU^,s/ ml                                                          = 3,1 x 10^-7 CFU^,s/ ml

LAMPIRAN